Полимеразды тізбекті реакция (инфекциялардың ПТР диагностикасы) биоматериалды үлгілердегі белгілі бір патогенді микроорганизмдерге тән ДНҚ сегменттерін анықтауға негізделген (урогенитальды трактің эпителиалдық жасушаларын, қандарды немесе басқа). Полимеразды тізбекті реакция - бұл бактериалды, вирустық, бактериялық инфекциялардың диагностикасы үшін «алтын стандарт». Сынақ зертханада көптеген көшіруге (күшейтуге) байланысты нақты патогенге тән ДНҚ үзінділерін анықтауға мүмкіндік беретіндіктен, жоғары ерекшелік пен сезімталдылыққа ие. ПТР арқылы патогенді анықтауды жұқпалы ауру симптомдары басталғанға дейін, яғни клиникалық кезеңде, сондай-ақ жұқпалы латентальды кезеңде және басқа зертханалық әдістер (бактериологиялық, вирусологиялық, серологиялық) кезінде әлі де оң нәтиже бермейтін жағдайларда мүмкін.

Зертханалық диагностика әдісі ретінде полимеразды тізбекті реакция (ПТР) 1983 жылы американдық биохимик Кэри Муллиспен патенттелді, бірақ осы саладағы параллельді зерттеулерді басқа американдық және кеңестік ғалымдар жүзеге асырды. Дегенмен, он жыл өткеннен кейін химия саласындағы Нобель сыйлығымен марапатталған ПТР әдісінің әкесі К.Муллис болды. ПТР клиникалық практикаға енгізу инфекциялық ауруларды диагностикалауда нақты революция жасады, өйткені ол ағзадағы патогенділердің ең аз концентрациясын тіпті тез анықтауға (1-2 күн ішінде) мүмкіндік берді. Бұл аурудың белсенді сатыларын ғана емес, олардың созылмалы және жасырын курсын диагностикалауға мүмкіндік береді. ПТР зерттеуі вирустық гепатит, АИТВ, ЖЖБИ, туберкулез, тыныс алу, ішек жолдары, өтетін инфекциялар және тағы басқалар диагностикасында қолданылады. Қазіргі уақытта ПТР талдауы барлық жерде, Мәскеудегі барлық ірі зертханаларда жүргізіледі.

Зерттеудің мәні

Полимеразды тізбекті реакция зерттелетін адамнан алынатын биологиялық үлгілерде олардың генетикалық материалдарын (РНК немесе ДНҚ) анықтау арқылы патогендік микроорганизмдерді анықтайды. Бұл зертханалық жағдайларда DNA polymerase ферменттерінің қатысуымен белгілі бір патогенді нуклеин қышқылының фрагментін бірнеше есе көбейту арқылы қол жеткізіледі. Бұл кезде зерттелетін материалда белгілі бір патогенге тән ДНҚ-ның қатаң анықталған бөлімі ғана көшіріледі (күшейеді). Зертханалық процесс 3 кезеңнен тұрады.

1. ДНК оқшаулау. ДНҚ қоспалардан (белоктар, қан, слиз) тазарту үшін, үлгі сорбент арқылы өтеді, жуады, центрифугирленген, кептіріледі. Тұнба еріген, элюентте тазартылған ДНҚ алу.

2. Күшейту . ПТР талдауы күшейткіште жүргізіледі - түтіктерді 0,1 ° С дәлдікпен циклдік режимде мезгіл-мезгіл қыздыру және салқындатуды қамтамасыз ететін арнайы құрылғы термостаты. Әдетте, бір зерттеуде 20-35 цикл орындалады, олардың әрқайсысы үш фазадан тұрады: ДНК денатурация, жану және матрицалық тізбекті ұзарту. Бірінші кезеңде ДНК үлгісін қамтитын реакциялық ерітіндінің көмегімен, екі праймерден (қажетті фрагменттің ұштарына қосымша қосатын қысқа синтетикалық олигонуклеотидтер), ДНК полимеразы, деоксиндікотифосфат, магний иондары және буферлік ерітінді 30-40 секунд бойы 93-95 ° C дейін қызады . Жылытудың нәтижесінде денатурация пайда болады - олардың арасындағы сутегі байланыстарының жойылуына байланысты екі жақты ДНҚ үлгісінің тізбектерінің дивергенциясы. Содан кейін қоспаның температурасы 50-65 ° C дейін төмендейді, бұл праймерлерге ДНҚ үлгісіне байланыстыруға мүмкіндік береді. ПТР-ның осы фазасы (пісіру кезеңі) 2 минуттан аспайды. Үшінші кезеңнің ағымы үшін - матрицалық тізбекті ұзарту немесе аяқтау үшін - қоспасы 72 ° C дейін қызады (үшінші фазаның уақыты күшейтілген аймақтың ұзындығына байланысты - орта есеппен 20-40 секунд). Осылайша, тест-түтіктегі екі-үш ондаған цикл үшін ДНҚ-ның фрагменттерінің көптеген көшірмелері жинақталып, патогенді табу, сәйкестендіру, сапалық немесе сандық бағалау үшін жеткілікті.

3. Электрофорез. Күшейту өнімдерін қамтитын алынған субстрат агароздық гельді ұңғымаларға орналастырылады. Анализатор ток көзіне қосылған, электрофорез жүргізеді. Электр тогының әсерінен нуклеин қышқылының фрагменттері бөлініп, ультракүлгін сәулелердегі жылтыраңқы жолақ түрінде траниллилирлеушіде айқын көрінеді. Қорытындылай келе, компьютерде талданатын сурет (электрофореграмма) алынды.

Жоғарыда сипатталған әдіспен бірге, Real-Time PCR кеңінен қолданылады. Реакциялық қоспаға жоғары арнайы флуоресцентті жапсырмаларды қосу арқылы стандартты ПТР ерекшеленеді, бұл әрбір цикл аяқталғаннан кейін нақты уақыт аралығында күшейтілген ДНҚ мөлшерін өлшеуге мүмкіндік береді. Нақты уақыттағы ПТР сапалы және сандық талдауды, аурудың кезеңі мен динамикасын, этиотропты терапияның тиімділігі туралы қорытынды жасауға мүмкіндік береді. Техника генотиптеу үшін де қолданылады - вирустық штамдарды анықтау (мысалы, HPV немесе гепатит В).

Қолдану салалары

ПТР диагностикасының негізгі бағдарламалары:

  • Жұқпалы аурулар - ауада, тасымалданатын және қан өткізетін жұқпалы аурулардың кең ауқымындағы қоздырғыштарды анықтау;
  • гинекология , урология және венерология - урогенитальды инфекциялардың патогендерін анықтау;
  • онкология және гематология - онкологиялық аурулармен байланысты ісік жасушалары мен гендерін анықтау;
  • генетика - тұқым қуалайтын ауруларды диагностикалау, туыстық және әке болу;
  • эпидемиология - тағамның патогендерін анықтау;
  • экология - қоршаған ортаның объектілерін (топырақ, су) бақылау;
  • сот медицинасы - жеке сәйкестендіру және т.б.

Клиникалық медицинада ПТР талдауы әр түрлі инфекциялардың (вирустық, бактериялық, паразиттік және т.б.) диагностикасында жиі қолданылады. Анықталған вирустың спектрі өте кең: олар АҚТҚ , А, В, С, Д, Г гепатиттерінің қоздырғыштары болуы мүмкін; цитомегалия , жұқпалы мононуклеоз , 1 типті және 2 типті герпес, адам папилломавирус инфекциясы (оның ішінде онкогинді HPV типтері), тик энцефалит және тағы басқалар. Бактериялық агенттердің ішінде Helicobacter pylori, туберкулездің патогендері, листериоз , камбилобактериоз , гарднереллез , гонорея , мерез . ПТР диагностикасы басқа зертханалық әдістермен, сондай-ақ саңырауқұлақтар мен протозоидтардан ( кэндиоз , трихомониаз ) туындаған инфекцияларды анықтауға қиын болатын хламидиялар, уреаплазмалар және микоплазмалардың ішіндегі паразиттерді анықтау үшін кеңінен қолданылады.

Осы және басқа инфекциялардың диагностикасындағы ПТР ерекшелігі 100% құрайды, бұл микробиологиялық, серологиялық, микроскопиялық әдістерге қарағанда әлдеқайда жоғары. ПТР диагностикасының сөзсіз артықшылығы - бір мезгілде бірнеше биожинақтағы патогенді анықтауға мүмкіндік береді, сондықтан көптеген зертханалар кешенді зерттеулерді ұсынады - ПТР-6, ПТР-9, ПТР-12, ПТР-20 жұқпалары .

Материалды қабылдау ережелері

ПТР арқылы зерттелетін биологиялық үлгілер - қан, сілекей, зәр, ұрық, қынжылу, жыныстық трактаттың секрециясы, жұлын сұйықтығы, плюрлы сұйықтық, артикулярлық сұйықтық, сондай-ақ эпителиальды қыртыстарды және биопсияларды дерлік болуы мүмкін. Дегенмен, нәтижелердің дұрыстығына негізінен талдау әдісіне қатаң сәйкестікке ғана емес, сонымен бірге зерттелетін материалдарды жинау мен тасымалдаудың дұрыстығына да тәуелді болады.

ПТР диагностикасы үшін кез-келген биологиялық үлгілер жинағы емдеу бөлмесінің жағдайында жүргізіледі. Осы мақсаттарда тек қана стерильді (бір реттік қолжетімді) аспаптар мен контейнерлер пайдаланылады. Қан жинау үшін арнайы вакуумдық жүйе және антикоагулянтты бар бір реттік түтік қолданылады. Асептикалық және антисептикпен сәйкестігі материалдың сыртқа ластануын болдырмайды және, тиісінше, сенімсіз деректерді алуда.

Талдау үшін дайындықта белгілі бір талаптар бар. Мәселен, урогенитальды тракттан ластанып кетуден және тыртықпастан бұрын, талдаудан 3 күн бұрын жынысты жыныстық жолмен алып тастау керек, бактерияға қарсы агенттермен бірге 3 сағат бойы емделмеу керек. Әйелдер менструация қарсаңында биоматериалды қабылдауды немесе аяқталғаннан кейін 1-2 күннен кейін ұсынылады, өйткені осы кезеңдерде инфекциялық агенттердің саны барынша жоғары. ПТР диагностикасы үшін қан сынамасын таңертең ашық асқазанға салу керек. Зерттеу материалы несеп болса, онда оның алғашқы таңертеңгі бөлігі жиналады. Тұзды жеткізгенге дейін ауыз қуысын тұздан үш рет шайып тастау керек.

Алынған сынама диагностикалық зертханаға тез арада жеткізілуі керек (егер дереу тасымалдау мүмкін болмаса, материал тоңазытқышта + 4 ° C + 8 ° C температурасында сақталады). Биоматериалдардың белгілі бір түрлеріне бір реттік тоңазыту және еріту рұқсат етілген. Үлгілермен контейнерлер (түтікшелер) белгіленіп, белгіленген нысанда толтырылған ПТР сынағына жол беріледі. ПТР талдауының соңғы нәтижесі 1-2 күн ішінде дайын болады (кейде бірнеше сағатта).

Нәтижелері

ПТР зерттеудің сапалы нәтижесі оң немесе теріс болуы мүмкін. Позитивтік талдау сынақ материалында қалаған жұқпалы агенттерді идентификациялауды көрсетеді; теріс - олардың болмауы үшін. Жалған теріс нәтижелерді алу дерлік мүмкін емес; олардың ең аз пайызы жасырын инфекциямен немесе созылмалы инфекциямен шиеленіспей байланысты болуы мүмкін. Жалған позитивті реакциялар, әдетте, адам факторларына байланысты (үлгілерді дұрыс жинау, сақтау және тасымалдау, ПТР әдісін бұзу).

Кванттандыру (материалдың үлгілеріндегі IU / ml үлгілеріндегі патогеннің ДНҚ-ны немесе РНҚ жиынтығын анықтау) денедегі вирустық / бактериялық жүктемені, яғни жұқпалы процестің белсенділігін бағалауға мүмкіндік береді. Сандық талдау есірткінің дозасын таңдауға және емдеу курсының ұзақтығын анықтауға көмектеседі. Этиотропты терапияны аяқтағаннан кейін 1 ай өткен соң, ПТР-ның бақылауы жүргізіледі.

Мәскеуде мамандандырылған зертханаларда және қажетті жабдықтармен және сынақ жүйелерімен жабдықталған медициналық орталықтар зертханаларында ПТР әдісімен талдау жүргізуге болады. ПТР бағалары анықталған патогендердің санына, сапалы немесе сандық тестілеуге, талданатын материалдың түріне байланысты.

Мәскеуде полимеразды тізбекті реакция (ПТР)

577 клиника табылды
Картада көрсету  
Ол Воронцовскідегі клиникалар
ул. Мәскеу, ст. Воронцовская, 8, 6-бет
м. Таганская
жақсы
Ол Большая Молчановкадағы клиникалар
ул. Мәскеу, ст. Молчановка, 32, 1-б
Смоленская метро станциясы
жақсы
Клара Зеткиннің CM-клиникасы
ул. Мәскеу, ст. Клара Зеткин, 33/28
Воджковская
жақсы
Ол Зубовский бульварындағы клиникалар
Зубовский б-р, д. 35, стр. 1 Мәскеу қ., Зубовский к-сі, 35, 1-үй
Мәдениет паркі
жақсы
Ярославльдегі SM-клиникасы
ул. Мәскеу, ст. Ярославская, 4 қабатты үй. 2
Алексеевская
жақсы
Yartsevskaya арналған SM-клиникасы
ул. Мәскеу, ст. Ярцевская, 8
Жастар
жақсы
Волгоград авенюсында SM-клиникасы
Волгоградский пр-т, д. 42, стр. 12 Мәскеу, Волгоград пр-т, 42-бет, 12-бет
Текстильщики
жақсы
Ол Trekhgorny Val-дегі клиникалар
Трехгорный Вал, д. 12 стр. 2 Мәскеу, Трехгорный Вал, 12 үй 2
1905 көшеде
жақсы
Raskova Lane-дағы SM-клиникасы
пер. Мәскеу, транс. Расковой, 14/22
Белоруссия
жақсы
Старопетровский өткеліндегі SM-клиникасы
Старопетровский пр-д, д. 7А, стр. 22 Мәскеу, Старопетровский даңғылы, 7А, 22-бет
Воджковская
жақсы

Қатысты аурулар

Сайтта жарияланған ақпарат
тек анықтама үшін арналған
білікті медициналық көмекті ауыстырмайды.
Сіздің дәрігеріңізбен кеңесіңіз!

Сайт материалдарын пайдаланған кезде белсенді сілтеме қажет.